“反向感染”（reverse infection）是指首先将病毒固定在培养载体上，如细胞培养平皿的细胞附着面，再加入细胞，使病毒进入细胞，这个过程即所谓的“反向感染”。

“反向感染”与“正向感染”的异同之处在于：
相同点：本质都是病毒进入细胞的过程。
不同点：
正向与反向：只是作为一种实验操作方法上先后顺序的差别，是形式上的不同。
正向：先接种细胞再加病毒去感染细胞；
反向：先将病毒固定在培养载体上，再接种细胞，使病毒进入细胞的过程。

“反向感染”在实验操作中的可资利用的优点：
这种实验操作上先后顺序的差别，使病毒反向感染具备了以下优点：
1）有利于对同一种病毒进行高通量转导多种细胞；
2）有利于对同一种细胞进行高通量感染多种病毒；
3）有利于对感染效率进行质量控制；
4）有利于将转化成为方便使用的产品。
我们的研究表明，包被了AAV病毒的细胞培养板可以在干燥状态下长期保存而不失去感染活性和效率。
关于AAV载体反向感染技术我们已申请了发明专利。

利用AAV载体反向感染技术我们检测了约10多种细胞，具体细胞种类包括但不限于：
BHK
A549
Hep G2
U937
SP2/0
Hela S3

AAV2反向感染U937细胞



AAV2反向感染的局限性
需要制备大量不同种类的AAV病毒
制作成本高
制作周期长
质量控制较为复杂
在一般性实验中，为克服AAV2反向感染的局限性，我们采用"反向转染"。

反向转染的概念：
转染指的是将质粒导入细胞的过程；
正向转染指的是先将细胞接种培养在培养载体上，再将质粒转导入细胞的过程；
反向转染是和正向转染相对而言的，即先将质粒固定在培养载体上，再接种入细胞，使质粒进入细胞的过程。

反向转染在实验操作中的可资利用的优点：
实现质粒高通量转染
实现转染操作简便可控
与病毒的反向感染相比较而言，成本相对较低廉

反向转染的常用的转染方法：
一、化学试剂方法：
1、阳离子脂质体法
2、阳离子聚合物 （PEI）
3、磷酸钙
4、DEAE－葡聚糖法
二、物理方法：
1、基因枪
2、电穿孔
3、显微注射

本课题组反向转染实验的初步结果
反向转染试剂：
首先选择了PEI作为反向转染的主要工具
已做工作：
对不同的转染条件进行了摸索和优化
初步结果表明反向转染方法可行，最高可达到70~80%的转染效率
对不同的细胞，转染效率差别较大
反向转染的稳定性还待继续研究

不同细胞的转染效率
下图左、中、右分别为A549、293、Hela