逆转录病毒载体服务

2010年第一季优惠！

带目的基因的逆转录病毒载体的小量包装优惠。

如果你能提供鉴定正确的带目的基因的逆转录病毒载体质粒，我们将以全部费用为：

RMB ￥4000的价格提供给你总量为1E9 CFU的重组逆转录病毒载体。

如果你不能做带目的基因的载体的构建，交给我们做，价格同样便宜合算！

带报告基因的逆转录病毒载体也将优惠提供。


逆转录病毒载体背景介绍：
几乎所有的病毒均可以合适地被改造成为载体。而以逆转录病毒为出发点改造出来的就是逆转录病毒载体。
经典的重组逆转录病毒载体包装体系通常包括以下两部分：
1、 逆转录病毒载体质粒如pLXSN。 该类质粒通常提供了逆转录病毒包装所需要的所有顺式作用元件，具体包括：
1）两个长末端重复序列（LTR）：含有整合和调节转录的必需序列；含有转录增强子和启动子；
2）tRNA 引物结合位点p；
3）包装信号序列ψ。
2、包装细胞系如PA317。该包装细胞整合了逆转录病毒包装所需要的所有必需基因（gag,pol,env）。

逆转录病毒载体的构建和制备的具体过程是：
将目的基因片段（如增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因）构建插入到逆转录病毒载体质粒pLXSN的多克隆位点，获得含目的基因片段的重组逆转录病毒载体质粒（如pLXSN-EGFP）；然后，将含目的基因片段的重组逆转录病毒载体质粒（如pLXSN-EGFP）转染包装细胞PA317，经过选择培养获得产病毒细胞系（VPC）；细胞不裂解，病毒不断分泌至培养上清中，由培养上清中就可以收获得到具有感染能力的含目的基因片段的重组逆转录病毒颗粒（如含EGFP的重组逆转录病毒颗粒）。

重组逆转录病毒载体能有效感染非分裂细胞和分裂细胞，将载体中所携带的目的基因整合到宿主细胞基因组中，使之随细胞基因组的分裂而分裂，目的基因能实现长期稳定的表达。大量文献研究表明，逆转录病毒载体能够感染那些其它载体难以转染的细胞，如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞，它能介导所包含的目的基因在脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等组织或细胞中长期表达。因此，人们常用逆转录病毒载体将目的基因（或RNAi）导入动物或者人原代细胞或细胞系。

服务内容：
公司为实验室研究者提供可用于细胞和动物实验的研究级的逆转录病毒载体的构建和制备服务，客户在质粒构建完成的情况下，公司能在30个工作日内提供所包装的逆转录病毒载体，最快可20个工作日内交货。

如果客户需要公司帮助将目的基因构建到载体穿梭质粒中，则需要70-90个工作日。

合同可提供的逆转录病毒载体的总量通常为： 1E6~1E7 CFU；
所提供的逆转录病毒载体的滴度通常为：1E4~1E6 CFU/ml。

客户应该提供物品的内容和信息：
1、质粒图谱；
2、大提的质粒；
3、质粒的质量：
260/280=1.8±0.05
浓度=0.1-1μg/μl

逆转录病毒包装服务的简要流程：
1、签订合同；
2、目的基因的的获得、测序鉴定（客户自备或付费）；
3、含目的基因片段的重组逆转录病毒载体质粒的构建和鉴定（客户自备或付费）；
4、含目的基因片段的重组逆转录病毒载体质粒的大量提取、纯化和质量检定；
5、含目的基因片段的重组逆转录病毒载体质粒转染包装细胞PA317，经选择培养获得产病毒细胞系；
6、细胞培养48hrs — 72hrs，收集含重组逆转录病毒颗粒的细胞培养上清液；
7、逆转录病毒载体的浓缩和纯化；
8、无菌过滤、分装、-70℃保存；
9、快递付运；
10、逆转录病毒载体制品的无菌检测、滴度测定、目的基因检定，并出具检测结果；
11、如果含目的基因的逆转录病毒载体穿梭质粒的构建服务是由本公司提供的话，公司将提供重组后的逆转录病毒载体质粒以及测序图谱。